Sterilizavimas autoklave apima tris skirtingus etapus:
Oro pašalinimas: Šiame pradiniame etape autoklavas pašalina orą iš kameros. Vakuuminis siurblys išsiurbia orą, sukurdamas žemo slėgio aplinką. Šis veiksmas užtikrina, kad garai efektyviai prasiskverbtų į visas vietas ir pasiektų apkrovą, kad būtų galima tinkamai sterilizuoti.
Sterilizacija: pašalinus orą, temperatūra autoklave pasiekia reikiamą lygį. Sotieji garai, generuojami esant slėgiui, naikina bakterijas, virusus ir kitus mikroorganizmus. Įprasta sterilizavimo temperatūra yra 121 laipsnis, kai slėgis yra 1,1 kilogramo/kvadratiniame centimetre (kg/cm²) (atitinka 15 svarų/kvadratiniame colyje (lb/in²)). Autoklavavimo trukmė skiriasi priklausomai nuo apkrovos tūrio, bet paprastai laikoma 15-20 min.
Aušinimas/džiovinimas: po sterilizavimo garai išleidžiami, o autoklavas atvėsina. Kai temperatūra yra saugi, atidaromos durelės ir sterilizuoti daiktai yra paruošti naudoti.
Veiksmingas oro pašalinimas, tinkama gaminių padėtis ir tinkamas kaitinimo laikas yra labai svarbūs sėkmingam sterilizavimui autoklave.