Nukleino rūgščių skaičiavimas spektrofotometruose
Nukleino rūgščių kiekybinis nustatymas yra dažniausiai naudojama spektrofotometro funkcija . Oligonukleotidai, viengubos dvigubos DNR ir RNR gali būti kiekybiškai išmatuoti buferiuose. Didžiausia nukleorūgšties absorbcijos smailės absorbcijos smailė yra 260 nm. Kiekviena nukleorūgštis turi skirtingą molekulinę sudėtį ir todėl turi skirtingus konversijos koeficientus. Norėdami kiekybiškai įvertinti skirtingų tipų nukleino rūgštis, iš anksto pasirinkite atitinkamus koeficientus. Pavyzdžiui, 1OD absorbcija atitinka 50 μg / ml dsDNR, 37 μg / ml ssDNR, 40 μg / ml RNR ir 30 μg / ml Olig, atitinkamai. Absorbcijos vertė po bandymo paverčiama aukščiau nurodytu koeficientu, kad būtų galima gauti atitinkamą mėginio koncentraciją. Prieš bandymą pasirinkite tinkamą procedūrą, įeikite į pradinį tirpalą ir skiediklį ir patikrinkite tuščią ir mėginio tirpalus. Tačiau eksperimentas buvo nelengvas. Nestabili skaitymai gali būti didžiausias galvos skausmas eksperimentuotojams. Kuo didesnis prietaiso jautrumas, tuo didesnis eksponuojamas absorbcijos dreifas.
Iš tiesų spektrofotometro konstrukcijos principas ir veikimo principas leidžia absorbcijos vertei pasikeisti tam tikrame diapazone, ty prietaisas tam tikru tikslumu ir tikslumu. Tokie kaip Eppendorfo biofotometro tikslumas ≤ 1,0% (1A). Šių daugkartinių testų rezultatai svyruoja tarp 1,0% vidurkio ir yra normalūs. Be to, turi būti atsižvelgiama į nukleino rūgšties fizikines ir chemines savybes, nukleorūgšties tirpinimo buferio pH, jonų koncentraciją ir tt. Bandymo metu per didelė jonų koncentracija taip pat sukelia rodymą dreifas kaip TE, kuris labai stabilizuos skaitymą. Praskiestoji mėginio koncentracija taip pat yra nedidelis veiksnys: dėl neišvengiamų mažų dalelių mėginio, ypač nukleino rūgšties, mėginių. Šių mažų dalelių buvimas trukdo bandymo poveikiui. Norint sumažinti dalelių įtaką bandymų rezultatams, nukleino rūgšties absorbcija turi būti ne mažesnė kaip 0,1 A, o absorbcija geriausia 0,1-1,5 A. Šioje srityje neturi būti burbuliukų. mišinys, ir nėra tuščiojo suspensijos. Priešingu atveju skaitymai smarkiai dreifuojami; tuščiajam bandiniui ir mėginio bandymui turi būti naudojama ta pati kolorimetrinė puodelė; priešingu atveju koncentracijos skirtumas yra per didelis; konversijos koeficientas ir ėminio koncentracijos vienetas yra tokie patys; Kiuketas, dėvimas po langą; mėginio tūris turi viršyti reikalaujamą minimalų spalvos taurės tūrį ir tt
Be nukleorūgšties koncentracijos, spektrofotometras rodo keletą labai svarbių santykių, siekiant parodyti mėginio grynumą, pvz., A260 / A280 santykį, siekiant įvertinti mėginio grynumą, nes baltymo absorbcijos smailė yra 280 nm. Grynų mėginių santykis yra didesnis nei 1,8 (DNR) arba 2,0 (RNR). Jei santykis yra mažesnis nei 1,8 arba 2,0, tai rodo baltymų ar fenolio medžiagų buvimą. A230 rodo, kad mėginyje yra tam tikrų teršalų, tokių kaip angliavandeniai, peptidai, fenoliai ir tt Grynosios nukleino rūgšties A260 / A230 santykis yra didesnis nei 2,0. A320 aptinka tirpalo drumstumą ir kitus trukdžių veiksnius. Grynasis mėginys A320 paprastai yra 0.
Įmonė specializuojasi spektrofotometrų pardavimo, pasveikinti klientus, kuriems reikia konsultuotis ir pirkti, mes suteiksime nuoširdų paslaugų ir kokybiškų produktų, taip pat mažesnes kainas.
El. Paštas: info@sumerlab.com
Interneto svetainė: sumerinstrument.com